光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計(jì)算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
光度計(jì)由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后,發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同,因此,每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線,根據(jù)這一特性,可對物質(zhì)進(jìn)行定性分析。由于物質(zhì)濃度的不同,吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度也不相同,從而通過對物質(zhì)吸光度或透過率的測量判定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
光度計(jì)使用的方法與步驟:
?。?)預(yù)熱儀器:
為使測定穩(wěn)定,將電源開關(guān)打開,使儀器預(yù)熱20min,為了防止光電管疲勞,不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時(shí)和在不測定時(shí)應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開,使光路切斷。
?。?)選定波長:
根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,轉(zhuǎn)動(dòng)波長調(diào)節(jié)器,使指針指示所需要的單色光波長。
?。?)固定靈敏度檔:
根據(jù)有色溶液對光的吸收情況,為使吸光度讀數(shù)為0.2~0.7,選擇合適的靈敏度。為此,旋動(dòng)靈敏度檔,使其固定于某一檔,在實(shí)驗(yàn)過程中不再變動(dòng)。一般測量固定在“1”檔。
?。?)調(diào)節(jié)“0”點(diǎn):
輕輕旋動(dòng)調(diào)“0”電位器,使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時(shí),比色皿暗箱蓋是打開的,光路被切斷,光電管不受光照)。
(5)調(diào)節(jié)T=100:
將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的第一格內(nèi),有色溶液放在其它格內(nèi),把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上,轉(zhuǎn)動(dòng)光量調(diào)節(jié)器,使透光度T=100,即,表頭指針恰好指在T=100處。
?。?)測定:
輕輕拉動(dòng)比色皿座架拉桿,使有色溶液進(jìn)入光路,此時(shí)表頭指針?biāo)緸樵撚猩芤旱奈舛華,讀數(shù)后,打開比色皿暗箱蓋。
?。?)關(guān)機(jī):
實(shí)驗(yàn)完畢,切斷電源,將比色皿取出洗凈,并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。